01/2025:53100
5.31. ZDRAVILA S FAGI
5.31. Phage therapy medicinal products
To splošno poglavje je objavljeno v informacijo.
Predstavlja okvirne zahteve za učinkovine in zdravila s fagi za uporabo v humani in veterinarski medicini ter njihovo proizvodnjo in kontrolo.
Določbe poglavja ne izključujejo uporabe alternativnih načinov proizvodnje in kontrole, ki so sprejemljivi za pristojni organ.
1. DEFINICIJA
Bakteriofagi (fagi) so bakterijski virusi. Njihovo pomnoževanje omogoča bakterijski gostitelj. Fage sestavlja proteinska kapsida, v katero je vgrajen genom iz eno- ali dvoverižne DNA ali RNA.
Zdravila s fagi (angl. phage therapy medicinal products – PTMPs) so izdelki, ki vsebujejo naravno prisotne ali gensko spremenjene fage in se uporabljajo za zdravljenje ali preprečevanje bakterijskih okužb pri ljudeh ali živalih.
Zdravila s fagi lahko vsebujejo en fagni sev, tj. posamezno učinkovino za zdravljenje s fagi, ali mešanico več fagnih sevov v kombinaciji s pomožnimi snovmi. Zdravila s fagi lahko apliciramo na različne načine in so na voljo v različnih farmacevtskih oblikah.
2. PROIZVODNJA
2-1. SPLOŠNE DOLOČBE
Fage pridobivamo s pomnoževanjem v gostiteljskih sevih bakterij in jih prečistimo z ustreznimi metodami.
Proizvodni proces mora zagotavljati ponovljivo kakovost in stabilnost zdravil s fagi. Ustrezno medprocesno preskušanje izvajamo v relevantnih časovnih točkah in/ali ključnih vmesnih stopnjah procesa.
Proizvodnja zdravil s fagi temelji na dobro opredeljeni bakterijski celični banki in sistemu izvorne fagne serije, pri čemer uporabimo ustrezno kombinacijo gostitelj-fag. Navadno se uporablja dvostopenjski sistem. Kadar je utemeljeno, se lahko uporabi enostopenjski sistem.
Zdravila s fagi lahko pripravimo na mestu zdravljenja kot odmerke, namenjene posameznemu ali več pacientom glede na specifične klinične potrebe.
Zdravila s fagi zahtevajo ustrezen okvir za zagotavljanje želene kakovosti, v nadaljevanju sistem kakovosti. Obsežnost sistema kakovosti pogojujejo tveganja, povezana z obravnavanim bolnikom, na primer mikrobna kontaminacija. Z oceno tveganja določimo stopnjo tveganja in zahtevano raven zagotavljanja kakovosti za doseganje ustrezne kakovosti izdelkov.
2-2. BAKTERIJSKE CELIČNE BANKE
Bakterijske gostiteljske celice, ki se uporabljajo za proizvodnjo zdravil s fagi, je treba podrobno opisati. To vključuje podatke o izvoru bakterijskega seva, poznejših namernih spremembah seva in preskusih, uporabljenih za opredelitev seva. Opis mora vključevati določitev profila občutljivosti na antibiotike ter določitev nukleotidnih zaporedij kromosoma(ov) in plazmidov. Če ni drugače utemeljeno in dovoljeno, se je treba izogibati uporabi bakterijskih sevov, katerih genom vsebuje zaporedja, ki kodirajo škodljive dejavnike (npr. profage, genske elemente oz. determinante odpornosti na antibiotike, toksine).
Bakterijske gostiteljske celice, ki se uporabljajo za proizvodnjo zdravil s fagi, izhajajo iz dobro opredeljene osnovne bakterijske celične banke (angl. bacterial master cell bank – MCB), ki je pripravljena iz enega samega celičnega klona in izpolnjuje naslednje zahteve:
Istovetnost. Istovetnost potrdimo z ustrezno metodo.
Mikrobna čistota. Odsotnost mikrobnih kontaminantov določimo z nanosom na gojišče ali katero koli drugo primerno metodo.
Viabilnost. Število viabilnih celic določimo s štetjem na trdnem gojišču ali katero koli drugo primerno metodo štetja viabilnih celic.
Občutljivost na fage. Občutljivost seva na učinkovino v zdravilu s fagi dokažemo s štetjem plakov ali drugo ustrezno metodo.
Odsotnost neželenih fagov. Potrdimo odsotnost fagnih delcev, ki bi lahko škodljivo vplivali na kakovost zdravila s fagi.
Če za proizvodnjo uporabljamo delovno celično banko (angl. working cell bank – WCB), slednja klonalno izvira iz osnovne bakterijske celične banke (MCB) in izpolnjuje zahteve zanjo.
2-3. FAGNE SERIJE
Fagne serije, uporabljene v proizvodnji zdravil s fagi, izhajajo iz enega samega klona faga in jih moramo podrobno opredeliti. Zagotoviti je treba informacije o izvoru faga, nukleotidnem zaporedju in občutljivih bakterijskih vrstah in/ali sevih. Po potrebi določimo tudi druge parametre, kot sta morfologija plaka ali morfologija faga.
Če ni drugače utemeljeno in dovoljeno, se izogibamo fagom, katerih genom vsebuje zaporedja, ki kodirajo znane ali potencialno škodljive genske dejavnike, npr. genske elemente oz. determinante odpornosti na antibiotike, toksine ali lizogene genske elemente oz. module. Za gensko ali kemično spremenjene fage je treba opisati spremembe in ovrednotiti njihove učinke.
Osnovna fagna serija izpolnjuje naslednje zahteve:
Istovetnost. Fagno serijo istovetimo z ustrezno metodo.
Mikrobna čistota. Odsotnost mikrobnih kontaminantov dokažemo z ustrezno metodo.
Čistota fagov. Odsotnost ekstrinzičnih fagov kot kontaminantov potrdimo z ustrezno metodo. Pri proizvodnji z uporabo kliničnih izolatov je lahko prisotnost intrinzičnih fagov neizogibna, zato je v tem primeru utemeljena in dovoljena, če je nadzorovana z ustrezno metodo.
Jakost. Titer infektivnega faga določimo s štetjem plakov ali katero koli drugo primerno metodo.
Če za proizvodnjo uporabljamo delovno fagno serijo, slednja klonalno izvira iz osnovne fagne serije in izpolnjuje zahteve za osnovno fagno serijo.
2-4. PROIZVODNJA IN ČIŠČENJE
Proizvodnja zdravil s fagi temelji na bakterijski celični banki in sistemu izvorne fagne serije, pri katerem se strogo izogibamo navzkrižni kontaminaciji med različnimi fagi in gostiteljskimi sevi bakterij. Genetsko stabilnost faga določimo s sekvenciranjem ustreznega števila prečiščenih žetev, ki mu sledi primerjava z nukleotidnim zaporedjem osnovne fagne serije.
Uporabljamo surovine farmacevtske kakovosti. Surovine biološkega izvora ustrezajo tudi zahtevam splošnega poglavja 5.2.12. Surovine biološkega izvora za izdelavo zdravil za celično in gensko zdravljenje.
Pred postopkom čiščenja lahko združimo več posameznih žetev istega fagnega klona.
Fage prečistimo z ustreznimi tehnikami.
Pri pripravi končne serije lahko uporabimo le prečiščeno žetev, ki vsebuje eno samo učinkovino za zdravljenje s fagi in izpolnjuje naslednje zahteve:
Istovetnost. Istovetnost faga potrdimo z ustrezno metodo.
Jakost. Titer infektivnega faga določimo s štetjem plakov (izraženo v PFU[1]/mL ali PFU/mg) ali s katero koli drugo primerno metodo.
Mikrobiološki pregled (2.6.12). Prečiščena žetev je skladna z navedeno specifikacijo.
Ostanki reagentov. Na podlagi ocene tveganja na prečiščeni žetvi izvedemo preskuse na ostanke med proizvodnjo uporabljenih reagentov, ki predstavljajo varnostna tveganja.
Nečistote in kontaminanti gostiteljskih celic. Kontaminanti in druge potencialno nevarne snovi, ki izvirajo iz gostiteljskih celic (npr. endo- in eksotoksini, proteini gostiteljskih celic, DNA gostiteljskih celic, temperatni fagi), niso prisotni ali so znotraj navedenih specifikacij.
2-5. KONČNA SERIJA
Končno serijo lahko apliciramo na različne načine in je lahko na voljo v različnih farmacevtskih oblikah. Zahtevani so dodatni preskusi, odvisno od farmacevtske oblike in načina uporabe.
Kadar za zdravila brez dovoljenja za promet z zdravilom izvajanje preskusov ni izvedljivo (npr. zaradi velikosti serije, časovnih omejitev), uporabimo druge ustrezne metode, da zagotovimo doseganje ustrezne kakovosti v skladu z izvedeno oceno tveganja in vsemi lokalnimi smernicami ali zakonskimi zahtevami.
Končna serija izpolnjuje naslednje zahteve:
Videz. Skladen z uveljavljeno specifikacijo.
Istovetnost. Istovetnost vsakega faga preverimo z ustrezno metodo.
Jakost. Titer infektivnega faga določimo za vsak fag s štetjem plakov (izraženo v PFU/mL ali PFU/mg) ali drugo ustrezno metodo in je skladen z navedeno specifikacijo za določen izdelek.
Mikrobiološka kakovost. Sterilna zdravila s fagi ustrezajo preskusu sterilnosti (2.6.1). Pri nesterilnih zdravilih s fagi mikrobiološko kakovost določimo z ustrezno metodo in je skladna z navedeno specifikacijo za določen izdelek.
Pirogenost. Če je potrebno, je končna serija skladna z ustreznim preskusom pirogenosti. Navodila za izbiro preskusa so navedena v splošnem poglavju 5.1.13. Rezultat preskusa je skladen z mejo, odobreno za določen izdelek.
Vsebnost vode (2.5.12 ali 2.5.32). Zdravila s fagi v trdni obliki so skladna z mejo, odobreno za določen izdelek.
pH (2.2.3). Zdravila s fagi v tekoči obliki so skladna z mejo, odobreno za določen izdelek.
2-6. PRILAGOJEN IZDELEK – IZDELEK S POVEČANO UČINKOVITOSTJO
Prilagajanje učinkovitosti fagov (in vitro evolucija) je proces, s katerim je mogoče fage usmeriti v razvoj, ki poveča njihovo učinkovitost proti kliničnemu izolatu (kliničnim izolatom).
Ko prilagojeno zdravilo s fagi uporabimo pri posameznem pacientu, ki je bil vir kliničnega izolata, se proces in vitro evolucije faga začne s fagom ali mešanico fagov, ki ustrezajo določbam poglavja 2-3. Končna serija mora biti skladna z določbami poglavja 2-5, razen če ni drugače utemeljeno in dovoljeno. Potrditi je treba povečano jakost končne serije prilagojenega zdravila s fagi proti ciljnemu kliničnemu izolatu, in prilagojeni fag uporabiti kot ustrezno nadomestilo pri preskusu istovetnosti.
3. LABELLING
Zahteve za označevanje so navedene v ustreznih nadnacionalnih in nacionalnih predpisih.
[1] angl. plaque-forming unit – PFU (plakotvorna enota) (op.prev.)
